《楊三姐告狀》講述了山東藩臺楊康源一人承擔了挪用軍餉的罪責。臨刑前，他把妻女托付給山東巡撫高敬堂。被罷官的高敬堂贖出了被賣進妓院的楊妻及女兒楊二娥和楊三娥，並命次子高成棟娶二娥為妻。
高敬堂的填房夫人林媚春和高成棟有私情。見高成棟成婚，林媚春妒火中燒。在林媚春的舅舅吳獻銘的安排下，二娥在林媚春房裏撞見了衣衫不整的高成棟。當三娥找高成棟算賬時，二娥把事情按了下去。
高成棟擔心二娥說出實情。吳獻銘給了他一包砒霜。二娥喝下放有砒霜的湯藥後，對高成棟說出了肺腑之言……
酒醉後的林媚春撞見了二娥七竅流血的屍體。
被買通的陰陽先生說二娥死於血崩之災。楊母和三娥趕到高家時，二娥已經入殮。三娥想不明白：二娥怎麽會突然死了呢？三娥要求開棺遭到拒絕。
楊康源的文書黃全，辭職回鄉照顧楊家母女。他幫三娥寫狀紙狀告高家。高敬堂要楊母管住三娥。
知縣陶鈺接下了三娥的狀子。藥鋪掌櫃供出吳獻銘買砒霜之事，吳獻銘被押入死牢。高成棟送來銀票，陶鈺以楊二娥砒霜中毒證據不足為由，而草草結案。三娥第一次告狀失敗。
吳獻銘將高成棟殺害二娥之事告訴了林媚春，並以各種手段向高成棟要錢。
三娥懷疑是林媚春害了二娥，再次狀告高家。陶鈺抓捕了林媚春和吳獻銘。高成棟又將銀票送到縣衙，陶鈺又以殺人證據不足而結案。
三娥無奈，向高成棟要了三萬兩銀票。她把銀票給了陶鈺。師爺水耗子答應三娥，一定將殺害二娥的兇手送上法場。
林媚春和吳獻銘被再次抓進了大牢。高成棟將林媚春的貼身丫頭紅姐作了替死鬼。林媚春和吳獻銘出獄。
正準備和黃全成婚的三娥脫下嫁衣，將高家告到府衙，並告知縣陶鈺收取賄賂、包庇罪犯。
高敬堂聞知楊三娥將高家告到府衙，為保全高家，他帶著家產上京捐官。
知府徐謙看到三娥的狀紙，立刻將陶鈺，水耗子，林媚春，吳獻銘，高成棟都緝拿歸案。
林媚春招認了自己與高成棟的奸情和高成棟殺妻的事實。高成棟被押下死牢；陶鈺、水耗子被免去官職；吳獻銘越獄逃跑。
高敬堂給淳親王送禮捐官不成，便派人到總督處狀告淳親王開黑店。爾後，高敬堂又以官復原職為交換條件，在總督面前替淳親王遮掩了事實真相。
就在徐謙準備親斬高成棟時，淳親王調離了徐謙，高敬堂如願當上了知府。隨即，高敬堂將陶鈺、水耗子官復原職；判決吳獻銘是害死二娥的兇手；釋放高成棟，休了林媚春。
楊母正高興地準備著三娥與黃全的婚事，傳來高成棟被釋放的消息，三娥如五雷轟頂。她直奔總督衙門再告高成棟。高敬堂聞之帶人沖進楊家……
總督衙門人去樓空。三娥回到家，看見娘倒在血泊裏……
大清滅亡。在北洋軍政府任職的黃全鼓勵三娥，再一次將高成棟告到檢察廳。
一聲槍響，楊三娥多年的冤案，幾經周折，終於平復。
